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最适用于合成Realtime PCR用cDNA的逆转录试剂盒。
Realtime PCR用cDNA合成试剂盒
ReverTra Ace® qPCR RT Kit
Realtime PCR用cDNA的合成
产品说明
ReverTra Ace®qPCR RT试剂盒(Code No.FSQ-101)采用了本公司高性能逆转录酶『ReverTra Ace®』,反应效率非常出色。另外,通过改良,使得带入到Realtime PCR反应体系中的逆转录反应液的影响降到最小,即使在PCR反应体系中添加20%体积的逆转录反应液,也能表现出良好的扩增线性。因此,最适合用于表达量较少的mRNA的高灵敏度检测。由于精简了试剂盒的构成,可非常简便地进行操作。 |
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产品特征
●可得到更广的可定量扩增区域
将Oligo dT 与Random Primer按最适比例预混,可均一、高效地在RNA全序列范围内进行逆转录,因此可得到更广的可定量扩增区域。
●与Realtime PCR试剂的配合性良好
采用了对Realtime PCR反应体系影响最小的组分,即使在PCR中添加最多20%的逆转录反应液,也可以得到很高的直线相关性。最适用于表达量少的mRNA的高灵敏度检测。
1.模板RNA量的添加量对合成效率影响的探讨
在ReverTra Ace® qPCR RT Kit的反应体系(10μl)中,分别添加HeLa细胞来源的total RNA 0.5μg - 0.5pg,分别进行逆转录反应。然后,采用和实验例2同样的方法进行cDNA合成量的比较。结果可见,在探讨的范围内,模板RNA的量和cDNA的得率密切相关,但无论模板RNA量的多寡,仍可维持很高的cDNA合成效率。由此可见,在目的片段浓度有差异的样品之间,逆转录反应效率的变化并不大,因此可将定量结果的误差控制在最小范围内。 |
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2.与用其他公司产品cDNA合成量的比较
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3. RNase H 处理与否对检测灵敏度影响的比较
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1)M. Hatta et al., Intl. J. Mol. Med., 9: 147-152(2002)
2)K.Miyazaki et al.,J.Bacteriology.,185:2219-2226(2003)
3)A.Nezu et al.,Biochem.J.,263:59-66(2002)
4)S.Nakashima et al.,J.Biochem.(Tokyo),131:241-246(2002)
5)S.Atsumi et al.,EMBO J.,20:5453-5460(2001)
6)Y.Yabuta et al.,Plant Cell Physiol.,41:666-675(2000)
7)S.Lee et al.,Gene,245:253-266(2000)
[FSQ-101]
5x RT Buffer 400μl
Enzyme Mix 100μl
Primer Mix 100μl
Nuclease-free Water 1000μl×2支
※试剂盒均为10μl反应体系情况下,可以使用200次。
[FSQ-101]
将RNA置于65℃,5min.
↓
置于冰上
灭菌蒸馏水 X μl
5x RT Buffer 2 μl
Enzyme Mix 0.5 μl
Primer Mix 0.5 μl
RNA 0.5pg~1μg
Total Volume 10 μl
↓
37℃, 15min.
98℃, 5min.
几点建议
●反应时间延长的效果
像tRNA等含量较多的RNA全部进行逆转录反应时,延长反应时间可提高得率,但一般情况下推荐37℃15分钟可得到足够的cDNA。
●可以使用的模板RNA的种类
Total RNA、mRNA、tRNA、rRNA等各种RNA都可以使用。
●无需RNase H处理
由于模板RNA的残留会对PCR产生抑制作用,一般情况下,逆转录反应结束后需通过RNase H对模板RNA进行分解。但本试剂盒采用了本公司新开发的体系,模板RNA在逆转录反应后通过非酶方法去除(正在申请专利),因此逆转录反应后无需进行RNase H处理。
FAQ请点击这里。
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品名 | Code No. | 包装 | 价格 | 保存温度 |
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ReverTra Ace | TRT-101 | 10000U × 1支 | RMB 800 | -20℃ | - |
购买人 | 会员级别 | 数量 | 属性 | 购买时间 |
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联系方式
、
上海总部: 021-33782046
浙江分公司: 0571-85341150
青岛分公司: 0532-82870706
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