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高效录qRT试剂盒
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高效录qRT试剂盒

最适合于定量PCR的高效率逆转录试剂盒,具有很高的逆转录效率及灵敏度,适合低丰度基因分析。
1500.00
¥1500.00
¥975.00
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重量:0.00KG
反应体系:
商品参数
  • 反应体系:10ul体系200次
商品描述
最适合于定量PCR的高效率逆转录试剂盒,具有很高的逆转录效率及灵敏度,适合低丰度基因分析。


最适用于合成Realtime PCR用cDNA的逆转录试剂盒。

Realtime PCR用cDNA合成试剂盒
ReverTra Ace® qPCR RT Kit

Code No. 包装 价格 保存温度 说明书
FSQ-101 200次份 RMB 1,500 -20℃ 产品说明书





产品用途

Realtime PCR用cDNA的合成



 产品说明

ReverTra Ace®qPCR RT试剂盒(Code No.FSQ-101)采用了本公司高性能逆转录酶『ReverTra Ace®』,反应效率非常出色。另外,通过改良,使得带入到Realtime PCR反应体系中的逆转录反应液的影响降到最小,即使在PCR反应体系中添加20%体积的逆转录反应液,也能表现出良好的扩增线性。因此,最适合用于表达量较少的mRNA的高灵敏度检测。由于精简了试剂盒的构成,可非常简便地进行操作。 








产品特征

可得到更广的可定量扩增区域

将Oligo dT 与Random Primer按最适比例预混,可均一、高效地在RNA全序列范围内进行逆转录,因此可得到更广的可定量扩增区域。

与Realtime PCR试剂的配合性良好

采用了对Realtime PCR反应体系影响最小的组分,即使在PCR中添加最多20%的逆转录反应液,也可以得到很高的直线相关性。最适用于表达量少的mRNA的高灵敏度检测。


 产品实验例


1.模板RNA量的添加量对合成效率影响的探讨

在ReverTra Ace® qPCR RT Kit的反应体系(10μl)中,分别添加HeLa细胞来源的total RNA 0.5μg - 0.5pg,分别进行逆转录反应。然后,采用和实验例2同样的方法进行cDNA合成量的比较。结果可见,在探讨的范围内,模板RNA的量和cDNA的得率密切相关,但无论模板RNA量的多寡,仍可维持很高的cDNA合成效率。由此可见,在目的片段浓度有差异的样品之间,逆转录反应效率的变化并不大,因此可将定量结果的误差控制在最小范围内。


 


2.与用其他公司产品cDNA合成量的比较

以来源于HeLa细胞的total RNA 100ng为模板,根据各公司试剂盒推荐的条件进行逆转录反应。然后,在Realtime PCR反应液(使用本公司SYBR Green Realtime PCR Master Mix)中分别添加上述的逆转录反应液各1% (V/V),用Realtime PCR对β-Actin和Polymerase ε的cDNA量进行定量。结果可见,在使用本试剂盒的情况下,两个目的片段都有最高的得率。 




3. RNase H 处理与否对检测灵敏度影响的比较

以来源于HeLa细胞的total RNA 100ng为模板,使用ReverTra Ace® qPCR RT Kit(蓝线)及另外添附RNase H的B公司cDNA合成试剂盒,按各自推荐的实验步骤进行逆转录反应(B公司试剂盒分别按RNase H处理(红线)/未处理(橙线)两种方法进行)。然后,按和实验例1同样的方法检测β-Actin的扩增效果。结果显示,用B公司的试剂盒RNase H未处理(橙线)的情况下,检测效果大幅下降。而用ReverTra Ace® qPCR RT Kit(蓝线)进行反应,即便不追加RNase H处理也能显示出很高的扩增效率。已经过实验证明,用本试剂盒RNase H处理与否灵敏度相等。
※本试剂盒不包含RNase H处理步骤。


参考文献

1)M. Hatta et al., Intl. J. Mol. Med., 9: 147-152(2002)
2)K.Miyazaki et al.,J.Bacteriology.,185:2219-2226(2003)
3)A.Nezu et al.,Biochem.J.,263:59-66(2002)
4)S.Nakashima et al.,J.Biochem.(Tokyo),131:241-246(2002)
5)S.Atsumi et al.,EMBO J.,20:5453-5460(2001)
6)Y.Yabuta et al.,Plant Cell Physiol.,41:666-675(2000)
7)S.Lee et al.,Gene,245:253-266(2000) 



产品内容

[FSQ-101]

5x RT Buffer 400μl

Enzyme Mix 100μl

Primer Mix 100μl

Nuclease-free Water 1000μl×2支

※试剂盒均为10μl反应体系情况下,可以使用200次。





基本反应条件

[FSQ-101]
将RNA置于65℃,5min.

置于冰上


灭菌蒸馏水 X μl
5x RT Buffer 2 μl
Enzyme Mix 0.5 μl
Primer Mix 0.5 μl
RNA 0.5pg~1μg
Total Volume 10 μl

37℃, 15min.
98℃, 5min.



几点建议

●反应时间延长的效果

像tRNA等含量较多的RNA全部进行逆转录反应时,延长反应时间可提高得率,但一般情况下推荐37℃15分钟可得到足够的cDNA。

●可以使用的模板RNA的种类

Total RNA、mRNA、tRNA、rRNA等各种RNA都可以使用。

●无需RNase H处理

由于模板RNA的残留会对PCR产生抑制作用,一般情况下,逆转录反应结束后需通过RNase H对模板RNA进行分解。但本试剂盒采用了本公司新开发的体系,模板RNA在逆转录反应后通过非酶方法去除(正在申请专利),因此逆转录反应后无需进行RNase H处理。

FAQ请点击这里




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