货热线:400-688-2055

电子邮箱

密码

注册 忘记密码?
货热线:400-688-2055
货热线:400-688-2055
质粒小量提取试剂盒
❤ 收藏

质粒小量提取试剂盒

Favorprep质粒小量提取试剂盒是一种极好的工具,提供了一种快速、经济的方法从细菌中分离纯化质粒DNA。该技术基于DNA在离液盐中结合硅胶膜,用含有乙醇的Wash Buffer洗涤DNA。与其它有害的或者耗时的步骤(如苯酚/氯仿抽提、乙醇沉淀法)相比,Favorprep质粒抽提试剂盒的处理时间约缩短了25分钟。高质量的质粒DNA可以直接用于下游实验中。
380.00
¥190.00
¥168.00
¥158.00
重量:0.50KG
使用次数:
商品参数
  • 使用次数:100次
商品描述
Favorprep质粒小量提取试剂盒是一种极好的工具,提供了一种快速、经济的方法从细菌中分离纯化质粒DNA。该技术基于DNA在离液盐中结合硅胶膜,用含有乙醇的Wash Buffer洗涤DNA。与其它有害的或者耗时的步骤(如苯酚/氯仿抽提、乙醇沉淀法)相比,Favorprep质粒抽提试剂盒的处理时间约缩短了25分钟。高质量的质粒DNA可以直接用于下游实验中。


最畅销的质粒小量提取试剂盒,品质稳定性价比高。

质粒小量提取试剂盒
FavorPrep™ Plasmid DNA Extraction Mini Kit

Code No. 包装 价格 保存温度 说明书
FAPDE100 100次 RMB 380 RNase存于-20℃ 产品说明书
FAPDE300-3 300次 RMB1000 RNase存于-20℃ 产品说明书

 FAPD1加入RNase A后必须保存在4 ℃,能保存到6个月,RNase A单独保存在-20 ℃;其它Buffer及离心管在室温保存一年.



 产品简述

     本试剂盒采用硅基质吸附材料,在高盐环境下质粒DNA能够特异性结合到硅基质上,然后用低盐的缓
冲液将质粒DNA从硅基质上洗脱下来,无需用到苯酚抽提、乙醇沉淀,也无需繁琐的操作过程。30分钟
内即可获得高纯的质粒DNA。


产品应用

     • 荧光或放射性标记测序
     • 连接
     • 限制酶切
      •  连接和转化
     • 文库筛选


产品特点
    


     高回收率:从过夜培养的1-3ml菌液中可提取高达30ug的质粒。
     使用方便:无需用苯酚抽提、乙醇沉淀,也无需繁琐的操作过程。
     节省时间:裂解后30分钟内,快速从菌液中分离出质粒DNA。
     通用性:细菌培养如大肠杆菌,颗粒、可溶解且中和型的细菌。


性能参数
      样品: 1-3ml 高拷贝的过夜培养菌可以纯化出30ug质粒DNA
      结合能力: 50ug
      预期产量: 高拷贝质粒:20-30ug,低拷贝质粒:3-10ug。
      操作时间:30分钟以内

操作流程




结果分析


1.用该试剂盒提取的质粒测序,测序仪用ABI 3700



2.纯化质粒的凝胶分析

M1 1  2  3    4   5   6   M2


由该试剂盒提取的5 个质粒
M: 1kb DNA ladder (100 bp-12,000 bp)
1: pBluescript II
2. pUC 18
3: pBR 322
4: pGem with 1 Kb insert
5: pET 43.1 with 2.7 Kb insert
6: cosmid (50 Kb)
M1: 1 Kb DNA Ladder
M2: Lambda-HindIII



                                    

FavorPrep™ Plasmid DNA Extraction Mini Kit
产品说明书


 目录号:FAPDE 001 (100  FAPDE 001-1 (300 )

 



简介

        Favorprep质粒小试剂盒是一种极好的工具,提供了一种快速、经济的方法从细菌中分离纯化质粒DNA
该技术基于
DNA在离液盐中结合硅胶膜,
用含有乙醇的Wash Buffer洗涤DNA。与其它有害的或者耗时的步骤(如苯酚
/氯仿抽提、乙醇沉淀法)相比,Favorprep质粒抽提试剂盒的处理时间约缩短了25分钟。高质量的质粒DNA可以直接
用于下游实验中。


 


规格

      样品:过夜培养物1~5 ml     质粒大小:<12 Kb

      得率:20~30 µg高拷贝质粒   操作时间:约25 min

 



试剂盒内容

                                                FAPDE001                FAPDE 001-1 

FAPD1 Buffer                               30 ml                      90 ml

FAPD2 Buffer                               30 ml                      90 ml

FAPD3 Buffer                               40 ml                      120 ml

W1 Buffer (concentration)*          35 ml                      98 ml

Wash Buffer (concentration)**      20 ml                      50 ml

Elution Buffer                                15 ml                      35 ml

RNase A (50mg/ml)                      60 µl                      180 µl

FAPD Column                              100 pcs                     300 pcs

Collection Tube                           100 pcs                     300 pcs

User Manual                                         1                           1

 

* W1 Buffer首次使用前加入13ml/ 36 ml无水乙醇

** Wash Buffer 首次使用前加入 80ml / 200 ml 无水乙醇  

 



注意事项

1. 本试剂盒提供的缓冲液有刺激性,操作时请戴手套和穿实验服。

2.  短暂离心 RNase A管将壁上和管盖上液体甩下来。添加1 ml FAPD1 Buffer 于RNase A试剂瓶中混合
均匀。将混合物转移到
FAPD1 Buffer试剂瓶中
保存4 ºC

3. 使用前请检查FAPD2 Buffer,如有沉淀产生,将FAPD2 Buffer 55 ºC保温10分钟,请勿用力振荡
FAPD2 Buffer

4. 为防止空气中CO2酸化FAPD2 Buffer在使用完立即盖上试剂瓶盖。

5. 对于FAPDE 001首次使用W1 Buffer前,请先加入13 ml乙醇96~100%;对于FAPDE 001-1
首次使用W1 Buffer前,请先加入36 ml乙醇(96~100%)

6. 对于FAPDE 001首次使用Wash Buffer前,请先加入80 ml乙醇(96~100%);对于FAPDE 001-1
首次使用Wash Buffer前,请先加入200 ml乙醇96~100%

7.所有离心速度,皆为14,000 rpm10,000×g

 



操作步骤

1. 1~5 ml菌液至微量离心管(需自备)。

2. 离心2分钟后,将上清液完全吸除。

3. 加入250 µlFAPD1 Buffer至离心管中来回吹打完全重悬细胞

    ●确认首次使用FAPD1 Buffer加入RNase A重悬后没有可见的细胞沉淀

4. 加入250 µl FAPD2 Buffer并轻轻翻转离心管5次,以裂解细胞并室温下孵育2分钟

    ●请勿使用振荡器,以避免打断基因组DNA。必要时,可继续颠倒离心管至裂解物变澄清。

    ●该步不要超过5分钟。

5. 加入350 µl FAPD3 Buffer并立即轻轻翻转离心管5次。

    ●立即翻转可以避免不均匀沉淀。

6. 离心10分钟。离心时放置一个FAPD ColumnCollection Tube

7. 小心的将上清液移至FAPD Column。离心1分钟弃滤液。

   ●注意,勿将白色沉淀物转移到柱子中。

8. 加入400 µlW1 Buffer FAPD Column.,离心1分钟弃滤液。

   ●使用前请确保乙醇(96-100 %)已加入到W1 Buffer

9. 加入750 µl 的 Wash Buffer 到 FAPD Column.,离心1分钟弃滤液。

   ● 使用前请确保乙醇(96-100 %)已加入到Wash Buffer

10. 离心5分钟干燥柱子。

   ●重要步骤步将除去残余的溶液,该溶液将会一直后续的酶促反应。

11.FAPD Column放入到一个新的1.5 ml的离心管中。

12.放入50 µl~100 µl Elution BufferddH2OFAPD Column。静置1分钟

   ●重要步骤为了有效洗脱,请确认洗脱液滴加在膜中央并被完全吸附

   ●重要:洗涤DNA的洗涤液不要低于50ul,否则会减低最终得率

13. 离心1分钟洗脱质粒DNA

14. 4 °C -20 °C保存质粒DNA

 



问题解答

 

细菌细胞未完全

     ●使用了太多的细菌细胞 (OD600 > 10)。将细菌细胞分离到多个中。

     ●加入FAPD3 Buffer后翻转离心管使沉淀溶解以确保高产率。

细菌细胞生长过度

     ●培养时间不应超过16个小时。

细菌细胞过少

     ●保证细菌细胞在适当条件下培养到一定的量(OD600>1)。

DNA洗脱步骤错误

     ●确保Elution Buffer加入并吸附FAPD Column 膜中央

DNA洗脱不完整 

     如果DNA片段长度10 Kb,使用预热过的Elution Buffer (60~70°C)可提高洗脱效率。

Wash Buffer错误 

     ●使用前确保 Wash Buffer 中加入了乙醇。

 

 

洗脱的DNA质量不好

 

乙醇残留

     ●洗涤之后,以最快的速度额外离心干燥FAPD Column 5分钟或 60 °C下保温5分钟。

 

基因组DNA污染

裂解不当

     ●加入FAPD2 Buffer后轻轻翻转离心管,孵育时间不得超过5分钟。

     ●不要使用生长过度的细菌。

 

 

 

问题解答

 

RNA污染质粒DNA

因为保存时间过长FAPD1 BufferRNase A活性不足

使用FAPD1 Buffer前确保加入RNase A 如果含RNase AFAPD1 Buffer过期,需额外加入RNase AFAPD1 Buffer终浓度为50 μg/ml然后保存4 °C下进行保温。

使用了足够的细菌细胞,减少了样品体积。

 

质粒DNA污染或降解

核酸酶污染

    ●如果使用的宿主细胞核酸酶活性比较高(如enA+ 细菌进行可选洗涤步骤以去除残留的核酸酶。

●DNA结合在 FAPD column中加入400 μl W1 Buffer ,并室温下孵育2分钟。

高速离心(14,000 rpm10,000×g)30秒。

然后洗涤。

 

用于酶切质粒不足

质粒DNA中残留有乙醇

确保洗涤后已除去洗涤液(步骤9)并额外离心3分钟(步骤10)。

 

变性的质粒DNA比超螺旋的在核酸电泳时迁移速度快 

FAPD2 Buffer孵育时间太长

    ●FAPD2 Buffer孵育时间不得超过5分钟。