高效率MMLV逆转录酶

ReverTra Ace

【产品简介】

对M-MLV RTase进行了改良　提高了延伸性・反应效率・高温反应性
ReverTra Ace是在M-MLV RTase基因的RNaseH活性区域和DNA合成区域中导入了本公司独特的点突变、改变了酶机能的高性能逆转录酶。实现了前所未有的高温反应性、延伸性和反应效率。

RNaseH活性在cDNA合成中，会分解作为模板/引物的DNA-RNA杂交体中的RNA，导致反应效率下降。而本酶可降低该RNaseH活性。另外，由于提高了RTase的高温反应性，故可通过提高反应温度缓和模板RNA的高级结构，促进RTase对cDNA的合成反应。本酶具有比原有的deletion型M-MLV RTase RNaseH−高约4倍的比活，可进行高效率的RT-PCR反应。

※还有使用本酶的开发的cDNA合成试剂盒。点击这里阅览详细。

【产品特征】

特征1　提高了延伸性
在M-MLV RTase的RNaseH活性区域内导入了点突变，去除了RNaseH活性。同以往的M-MLV RTase及deletion型的M-MLV RTase RNaseH−相比，延伸性有了明显的提高。
特征2　提高了反应效率・高温反应性
在M-MLV RTase的DNA合成区域中导入了点突变，提高了高温反应性和反应效率。
特征3　最适合于RT-PCR
适合于多种RT反应，尤其适用于RT-PCR。最适合于qPCR。

【产品实验例】

实验例1.42〜60℃时的cDNA合成反应

以带有poly(rA) Tail（长度分别为9.49、7.46、4.40、2.37、1.35kb）的RNA 0.4μg为模板，以oligo(dT)30 25pmoles为引物，在42〜60℃的反应条件下，用本酶100U，进行30min.的cDNA合成反应。
结果显示，用ReverTra Ace，在42℃及50℃时生成了9.49kb、55℃生成了4.4kb、60℃生成了2.37kb的cDNA合成产物。

实验例2.cDNA合成效率的比较
以在in vitro条件下合成的G3PDH的RNA 10²〜10⁵copies为模板，使用G3PDH的下游引物，42℃、20min.进行cDNA合成反应后，加入G3PDH上游引物，用rTaq DNA Polymerase进行PCR反应。
结果可见，用ReverTra Ace，即便是以10²copies的RNA为模板，也可确认到扩增产物。

实验例3.14kb的cDNA合成反应
以Human骨骼肌poly(rA) RNA为模板，制备针对dystrophin mRNA的3'端的特异性cDNA合成用引物，42℃、30min.进行cDNA合成反应后，在mRNA的5'端制备特异性PCR用Primer Set（位于cDNA合成引物上游14kb处），用KOD Dash 进行PCR。
结果可见，使用ReverTra Ace可延伸14kb以上。

【简要备注】

以1ug Poly A+ RNA为模板、以标记核苷酸的摄入量来表示模板的利用效率。结果显示，使用ReverTra Ace 10Unit时约为25%，100Unit时约为40%，显示了很高的值。

【相关信息】

●原理

【参考文献】

1）K.Miyazaki et al.,J.Bacteriology.,185:2219−2226（2003）
2）A.Nezu et al.,Biochem.J.,263:59−66（2002）
3）S.Nakashima et al.,J.Biochem.(Tokyo),131:241−246（2002）
4）S.Atsumi et al.,EMBO J.,20:5453−5460（2001）
5）Y.Yabuta et al.,Plant Cell Physiol.,41:666−675（2000）
6）S.Lee et al.,Gene,245:253−266（2000）

价格表

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