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去基因组逆转录试剂盒
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去基因组逆转录试剂盒

增加了去除基因组 DNA功能的qPCR用逆转录试剂盒


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商品描述

增加了去除基因组 DNA功能的qPCR用逆转录试剂盒



产品简介

TOROBlue® qRT Premix with gDNA Eraser是增加了去除基因组 DNA功能的qPCR用逆转录试剂盒。相对于竞品,表现了在保持逆转录效率不变的情况下,具有完全清除基因组DNA的能力。


产品组成

  TOROBlue® qRT Premix with gDNA Eraser (RTQ-201)采用10μL 反应体系可使用 100 次。主要成分如下:

组成

规格

数量

4×gDNA Eraser Mix

200μL/

1

5× qRT Premix 

200μL/

1

5 × No-RT Control   

50μL/

1

RNA Dilution Buffer  

1ml/

1

 

【储存条件】

  所有组分请均保存于-20℃条件下。长期不用时,请在-30℃条件下保存。


使用方法

1.试剂盒使用前请完全融化,并离心后使用。

2. 去除基因组DNA反应: 请在冰上配制如下反应液

 

组分

添加量

4×gDNA Eraser Mix

2μL

RNA template

0.5pg0.5μg

RNA Dilution Buffer

补足到8μL

 将反应液轻轻地搅拌均匀后,在37°C条件下温育5分钟。


3.逆转录反应液配制 请在冰上配制如下反应液。

组分

添加量

步骤2反应液

8μL

5× qRT Premix (或5 × No-RT Control   

2μL

总体积

10μL

 

4.逆转录反应条件:

 

步骤

条件

逆转录

3715min

逆转录

505min

酶失活

985min

保存

4

 

备注:-cDNA模板直接或稀释后用于qPCR,添加量不得超过qPCR反应体系的20%。

-该试剂盒使用的高温逆转录酶,可以使用37℃-60℃之间进行逆转录,逆转录时间根据模板量及片段长度在5min-30min中之间调整。


应用数据

1.去基因效果验证

反转录试剂:TOROBlue® qRT Premix with gDNA Eraser(RTQ-201,TOROIVD)

DNA模板:人基因组DNA 50ng/反应

实验组设置:

 

4×gDNA Eraser Mix

5× qRT Premix 

A

 (+)

    (+)

B

 (-)

    (+)

 

定量PCR试剂:TOROGreen® qPCR Master Mix (QST-100,TOROIVD).

模板: cDNA 2 μL/20 μL反应体系

目标基因GAPDH (非跨内含子设计)

上游引物AAAAGGGCCCTGACAACTCTT

下游引物GTCTTACTCCTTGGAGGCCA

仪器设备: CFX-96(Biorad)

实验结果: 


实验结论:A组无扩增表明该试剂盒中的gDNA Eraser可完全清除50ng人基因组DNA干扰。


2.逆转录性能的验证

反转录试剂TOROIVD® qRT Master Mix(RTQ-100,TOROIVD)

                         TOROBlue® qRT Premix with gDNA Eraser(RTQ-201,TOROIVD)

RNA模板:MS2RNA (Roche,无基因组DNA残留)

上游引物: GCCTTAGCAGTGCCCTGTCT
下游引物AACATGCTCGAGGGCCTTA


定量PCR试剂: TOROGreen® qPCR Master Mix (QST-100,TOROIVD)

模板: cDNA 2 μL/20 μL反应体系

仪器设备:CFX-96(Biorad)

实验结果:



                                                        

实验结论:尽管TOROBlue® qRT Premix with gDNA Eraser(RTQ-201)加入去基因组步骤,其反转录性能和不含去基因组的TOROIVD® qRT Master Mix(RTQ-100)  具有高度的一致性。


常见问题

1.市面上有去基因组及反转录完全混合使用方便的RT试剂盒,RTQ-201有何优势?

   答:去基因组及反转录完全混合qRT试剂盒,通常会大大提高基因组DNA去除不完全的风险。因基因DNA污染为MIQE指南要求必须验证的关键指标。我们采用两步法,既保持了极强的去基因残留污染的能力,又消除了热敏双链核酸酶对反转录的影响,从而保证了完全符合MIQE指南的关键指标要求。


2.为何和某些市面竞品对比,RTQ-201的Ct值略高?

   答:很多市面竞品往往去基因组残留污染能力不够,在未验证去基因组残留能力的前提下,往往会造成Ct值高的“假象”。所以保证基因组污染完全无影响的前提下,对比Ct值才有意义。


3.RTQ-201和其它市面荧光定量PCR检测试剂兼容性如何?

 答:因各公司试剂系配方差异,优先推荐我司荧光定量PCR试剂盒系列包括QST-100,QST-300及QET-100。兼容其它公司试剂盒时,请把cDNA稀释后使用且添加量不高于qPCR反应体系的20%


4.RTQ-201的逆转录条件与市场竞品兼容使用?

 答:RTQ-201采用我公司进化改造的TOROIVD® III Reverse Transcriptase,与市面竞品不同的是,该酶具有宽泛的高温逆转录活性,在37℃-60℃之间的Ct值差异在1.0之内。所以我RTQ系列兼容市面上绝大部分的反转录条件可以在不改变原产品逆转录条件的情况下使用。


【配套产品】

QST-100采用抗体热启动的SYBR Green定量PCR试剂,具有高特异、高稳定的特征,适合基因表达分析,SNP基因分型等用途。


货号

规格

规格

厂家

市场价格

QST-100

TOROGreen® qPCR Master Mix

20μl 反应 1000

TOROIVD

2000


QST-100
采用抗体热启动的Eva Green定量PCR试剂,具有高特异、高稳定的特征,不仅适合基因表达分析,SNP基因分型等用途,还可进行高分辨率融解曲线分析。

货号

规格

规格

厂家

市场价格

QET-100

TOROGreen® HRM qPCR Master Mix

20μl 反应 1000

TOROIVD

2400

 

QST-300采用快速化修饰热启动5G聚合酶的SYBR Green定量PCR试剂,具有高特异、高速度高灵敏,抗抑制等特征,适合基因表达分析,SNP基因分型等用途。

货号

规格

规格

厂家

市场价格

QST-300

TOROGreen® 5G qPCR Premix

20μl 反应 1000

TOROIVD

2400