最畅销的质粒小量提取试剂盒，品质稳定性价比高。

质粒小量提取试剂盒
FavorPrep™ Plasmid DNA Extraction Mini Kit

Code No.	包装	价格	保存温度	说明书
FAPDE100	100次	RMB 380	RNase存于-20℃
FAPDE300-3	300次	RMB1000	RNase存于-20℃

FAPD1加入RNase A后必须保存在4 ℃，能保存到6个月，RNase A单独保存在-20 ℃；其它Buffer及离心管在室温保存一年.

【产品介绍】

 本试剂盒采用硅基质吸附材料，在高盐环境下质粒DNA能够特异性结合到硅基质上，然后用低盐的缓冲液将质粒DNA从硅基质上洗脱下来，无需用到苯酚抽提、乙醇沉淀，也无需繁琐的操作过程。30分钟内即可获得高纯的质粒DNA。

【产品应用】

• 荧光或放射性标记测序

• 连接

• 限制酶切

• 连接和转化

• 文库筛选

【产品特点】

• 高回收率：从过夜培养的1-3ml菌液中可提取高达30ug的质粒。

• 使用方便：无需用苯酚抽提、乙醇沉淀，也无需繁琐的操作过程。

• 节省时间：裂解后30分钟内，快速从菌液中分离出质粒DNA。

• 通用性：细菌培养如大肠杆菌，颗粒、可溶解且中和型的细菌。

  
  

【性能参数】

样品：1-3ml 高拷贝的过夜培养菌可以纯化出30ug质粒DNA
结合能力：50ug
预期产量：高拷贝质粒：20-30ug，低拷贝质粒：3-10ug。
操作时间：30分钟以内。

【操作流程】

【结果分析】

1.用该试剂盒提取的质粒测序，测序仪用ABI 3700

2.纯化质粒的凝胶分析

M1123456M2

由该试剂盒提取的5 个质粒
M: 1kb DNA ladder (100 bp-12,000 bp)
1: pBluescript II
2. pUC 18
3: pBR 322
4: pGem with 1 Kb insert
5: pET 43.1 with 2.7 Kb insert
6: cosmid (50 Kb)
M1: 1 Kb DNA Ladder
M2: Lambda-HindIII

FavorPrep™ Plasmid DNA Extraction Mini Kit
产品说明书

目录号：FAPDE 001 (100 次)  FAPDE 001-1 (300 次)

【产品简介】

       Favorprep质粒小量提取试剂盒是一种极好的工具，提供了一种快速、经济的方法从细菌中分离纯化质粒DNA。该技术基于DNA在离液盐中结合硅胶膜，用含有乙醇的Wash Buffer洗涤DNA。与其它有害的或者耗时的步骤（如苯酚/氯仿抽提、乙醇沉淀法）相比，Favorprep质粒抽提试剂盒的处理时间约缩短了25分钟。高质量的质粒DNA可以直接用于下游实验中。

【产品规格】

样品：过夜培养物1~5ml     

质粒大小：<12Kb

得率：20~30µg高拷贝质粒   

操作时间：约25min

【试剂盒内容】

                                                FAPDE001                FAPDE 001-1 

FAPD1 Buffer                               30 ml                      90 ml

FAPD2 Buffer                               30 ml                      90 ml

FAPD3 Buffer                               40 ml                      120 ml

W1 Buffer (concentration)*          35 ml                      98 ml

Wash Buffer (concentration)**      20 ml                      50 ml

Elution Buffer                                15 ml                      35 ml

RNase A (50mg/ml)                      60 µl                      180 µl

FAPD Column                              100 pcs                     300 pcs

Collection Tube                           100 pcs                     300 pcs

User Manual                                         1                           1

 * W1 Buffer首次使用前加入13ml/36ml无水乙醇。

** Wash Buffer首次使用前加入80ml/200ml无水乙醇。

【注意事项】

1.本试剂盒提供的缓冲液有刺激性，操作时请戴手套和穿实验服。

2.短暂离心 RNase A管将壁上和管盖上液体甩下来。添加1 ml FAPD1 Buffer 于RNase A试剂瓶中混合均匀。将混合物转移到FAPD1 Buffer试剂瓶中，并保存在4 ºC。

3.使用前请检查FAPD2 Buffer，如有沉淀产生，将FAPD2 Buffer 在55 ºC保温10分钟，请勿用力振荡FAPD2 Buffer。

4.为防止空气中CO2酸化FAPD2 Buffer，请在使用完后立即盖上试剂瓶盖。

5.对于FAPDE 001，首次使用W1 Buffer前，请先加入13 ml乙醇（96~100%）；对于FAPDE 001-1，首次使用W1 Buffer前，请先加入36 ml乙醇(96~100%)。

6.对于FAPDE 001，首次使用Wash Buffer前，请先加入80 ml乙醇(96~100%)；对于FAPDE 001-1，首次使用Wash Buffer前，请先加入200 ml乙醇（96~100%）。

7.所有离心速度，皆为14,000 rpm或10,000×g。

【操作步骤】

1.取1~5ml菌液至微量离心管（需自备）。

2.离心2分钟后，将上清液完全吸除。

3.加入250µl的FAPD1 Buffer至离心管中，并来回吹打完全重悬细胞。

• 确认首次使用FAPD1 Buffer已加入RNase A。重悬后没有可见的细胞沉淀

4.加入250µl的FAPD2 Buffer并轻轻翻转离心管5次，以裂解细胞并在室温下孵育2分钟

• 请勿使用振荡器，以避免打断基因组DNA。必要时，可继续颠倒离心管至裂解物变澄清。

• 该步不要超过5分钟。

5.加入350µl的FAPD3 Buffer并立即轻轻翻转离心管5次。

• 立即翻转可以避免不均匀地沉淀。

6.离心10分钟。离心时放置一个FAPD Column到Collection Tube。

7.小心的将上清液移至FAPD Column。离心1分钟，弃滤液。

• 注意，勿将白色沉淀物转移到柱子中。

8.加入400µl的W1 Buffer 到FAPD Column.，离心1分钟，弃滤液。

• 使用前请确保乙醇(96-100 %)已加入到W1 Buffer。

9. 加入750µl的 Wash Buffer 到 FAPD Column.，离心1分钟，弃滤液。

• 使用前请确保乙醇(96-100 %)已加入到Wash Buffer。

10. 离心5分钟，干燥柱子。

• 重要步骤！该步将除去残余的溶液，该溶液将会一直后续的酶促反应。

11.将FAPD Column放入到一个新的1.5ml的离心管中。

12.放入50µl~100µlElution Buffer或ddH2O至FAPD Column。静置1分钟。

• 重要步骤！为了有效洗脱，请确认洗脱液滴加在膜中央并被完全吸附。

• 重要：洗涤DNA的洗涤液不要低于50ul，否则会减低最终得率。

13.离心1分钟洗脱质粒DNA。

14.在4°C或-20°C下保存质粒DNA。

【问题解答】

低得率

细菌细胞未完全裂解

• 使用了太多的细菌细胞 (OD600 > 10)。将细菌细胞分离到多个管中。

• 加入FAPD3 Buffer后翻转离心管使沉淀溶解以确保高产率。

细菌细胞生长过度

• 培养时间不应超过16个小时。

细菌细胞过少

• 保证细菌细胞在适当条件下培养到一定的量（OD600>1）。

• 
  

DNA洗脱步骤错误

• 确保Elution Buffer加入并吸附到FAPD Column 膜中央。

• 
  

DNA洗脱不完整 

• 如果DNA片段长度大于10 Kb，使用预热过的Elution Buffer (60~70°C)可提高洗脱效率。

Wash Buffer错误 

• 使用前确保 Wash Buffer 中加入了乙醇。

洗脱的DNA质量不好

乙醇残留

洗涤之后，以最快的速度额外离心干燥FAPD Column 5分钟或 60 °C下保温5分钟。

基因组DNA污染

裂解不当

• 加入FAPD2 Buffer后轻轻翻转离心管，孵育时间不得超过5分钟。

• 不要使用生长过度的细菌。

  
  

RNA污染质粒DNA

因为保存时间过长FAPD1 Buffer的RNase A活性不足

• 使用FAPD1 Buffer前确保加入RNase A 。如果含RNase A的FAPD1 Buffer过期，需额外加入RNase A到FAPD1 Buffer中至终浓度为50 μg/ml，然后保存在4 °C下进行保温。

• 使用了足够的细菌细胞，减少了样品体积。

质粒DNA污染或降解

核酸酶污染

• 如果使用的宿主细胞核酸酶活性比较高（如enA+ 细菌），进行可选洗涤步骤以去除残留的核酸酶。

• DNA结合后，在 FAPD column中加入400 μl 的W1 Buffer ，并室温下孵育2分钟。

• 高速离心(14,000 rpm或10,000×g)30秒。

• 然后洗涤。

用于酶切质粒不足

质粒DNA中残留有乙醇

• 确保洗涤后已除去洗涤液（步骤9）并额外离心3分钟（步骤10）。

 变性的质粒DNA比超螺旋的在核酸电泳时迁移速度快 

在FAPD2 Buffer中孵育时间太长

• 在FAPD2 Buffer中孵育时间不得超过5分钟。