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高成功率直接PCR酶--KOD FX
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高成功率直接PCR酶--KOD FX

KOD FX是在KOD DNA polymerase基础上开发的高成功率PCR酶,任何高难度PCR反应,一酶解决!可以高特异扩增高GC含量、长片段、及微量模板的目的DNA,另外由于抗PCR抑制能力强,可以从粗样品或样品直接扩增,极大降低了核酸提取的成本及时间。
1200.00
¥840.00
¥900.00
¥840.00
重量:0.00KG
使用单位:
配件
商品参数
  • 使用单位:200U
商品描述
KOD FX是在KOD DNA polymerase基础上开发的高成功率PCR酶,任何高难度PCR反应,一酶解决!可以高特异扩增高GC含量、长片段、及微量模板的目的DNA,另外由于抗PCR抑制能力强,可以从粗样品或样品直接扩增,极大降低了核酸提取的成本及时间。
 

粗样品、扩增困难的序列请交给我们!

高成功率PCR酶
KOD FX                                                                                                                                                                                                                         

Code No. 包装 价格 保存温度 说明书
KFX-101 200U×1支 RMB 1,200 -20℃ 产品说明书




产品用途

       高GC含量PCR 

       长片段PCR,克隆及突变

       粗样品直接PCR


 产品简述

  KOD FX是在KOD DNA polymerase基础上开发的高性能PCR试剂。本酶具有出色的「扩增成功率」、「延伸性」和「扩增效率」,可对各种长度的目的片段进行PCR。
  KOD FX是PCR成功率非常高,适合于所有实验的PCR酶。
实际测序结果表明,KOD FX在PCR过程中,产生碱基错配的频率(错配率)144535个碱基中仅为19个(保真性是Taq DNA polymerase的约11倍)。由此可见,KOD FX的保真性虽比KOD -Plus-、KOD -Plus-Ver.2和KOD -Plus- Neo要差一些,但仍可进行充分的克隆。通过本酶扩增的DNA片段的末端基本上都被平滑化。


产品特征

高扩增成功率
对高GC含量的目的片段、细胞悬浊液、小鼠尾巴/植物裂解液、全血、霉菌、酵母等粗样品也可进行高成功率扩增。

超群的扩增效率
由于得率很高,因此即便模板量很少也可进行扩增。

出色的延伸性
已确认:以λDNA为模板可以扩增出40kb;以人类基因组DNA为模板可扩增出24kb;以cDNA为模板可扩增出13.5kb。

通过热启动提高了PCR的反应效率
通过将2种抗KOD单克隆抗体预混合在酶中,抑制了PCR反应前常温状态下的多聚酶活性和3'→5' Exonuclease活性。
抗体在PCR最初的变性步骤即发生失活,但对扩增反应没有任何影响。


产品实验例

1. 碱裂解法制备的鼠尾裂解液的扩增例

向直接PCR反应液中添加碱裂解法(请参照右边的基本反应条件)制备的鼠尾裂解液0.5μl,以Mouse membrane
glycoprotein(Thy-1)gene(M10246)为目的基因,用2步法循环,作30个循环的扩增。

结果显示,只有使用KOD FX时,才可以确认到明确的扩增。碱裂解法,相比使用Proteinase K的方法,操作简单
,可以更加简便地分析转基因鼠的基因。

另外,扩增产物无须纯化,以下是用几种限制性内切酶消化处理的结果,可以确认扩增产物可被内切酶完全消化切断。


2. 一步法制备的植物裂解液的扩增例

向直接PCR反应液中添加一步法(请参照右边的基本反应条件)制备的番茄、烟叶、稻叶及精米裂解液1μl,以rbcL为目的基因
,用2步法循环,作30个循环的扩增。
结果显示,只有使用KOD FX时,才可确认到明确的扩增。通过将一步法与KOD FX组合,就可以简便地对植物基因进行分析。

3. 模板DNA量的探讨

使用KOD FX与其他公司的PCR酶,比较了模板DNA的量与扩增效率。

扩增反应中,以0.1ng~100ng的基因组DNA为模板,以human β-globin 2.8kb为目的基因,50μl反应体系,引物
15pmoles,KOD FX使用了1U,按2步法,作了30个循环的扩增。

结果显示,相比其他公司的PCR酶,KOD FX可以得到更高的扩增效率。


 ※用户实验例

实验例1~4:点突变及克隆、高GC含量扩增实验案例


实验例5: Long Target(〜40Kb)的扩增例

实验例6: 挑战扩增真核细胞最长基因DMD(13.5Kb)的PCR克隆

实验例7: 少量模板(0.1ng~100ng)的扩增例

实验例8: 引物设计有限制时的扩增例

实验例9: GC含量高的目的片段的扩增

实验例10: 鼠尾裂解液的扩增例

实验例11: 血液(Whole Blood)样品扩增例

实验例12: 培养细胞的扩增例 直接使用细胞悬浊液样品

实验例13: 植物样品(叶・米粒)的PCR扩增例

实验例14: 直接使用鼠尾裂解液:转基因鼠的基因分型

实验例15: 使用转基因鼠鼠尾扩增进行基因分型例

实验例16: 使用人头发样品进行简便PCR扩增例

实验例17~18:转录因子及启动子长片段扩增

实验例19~20-人类CYP11A1基因启动子扩增及SF-1cDNA(GC-rich)的扩增

实验例21: 通过菌落PCR确认酵母重组体

实验例22: 新的水稻OsSRS3基因5′端区域的分离

实验例23: 使用从人粪便提纯的DNA扩增Helicobacter pylori cagA基因

实验例24: 从转基因大鼠血液(滤纸血)检测GFP基因

实验例25:DGGE法对沿海生息的植物-浮游生物(隐藻cryptophyta)的多样性分析

实验例26:使用KOD FX的绿脓菌DNA的基因扩增

实验例27: 小鼠尾巴裂解液的基因组DNA的扩增

实验例28: 对病原酵母Cryptococcus neoformans菌体(菌落)的直接PCR

实验例29: 对米曲菌(Aspergillus oryzae)直接PCR

实验例30: 对福尔马林固定石蜡包埋切片提取的DNA的分析

实验例31: 使用KOD FX对黄色黑腹果蝇羽翼的简便Long PCR法

实验例32: 使用KOD FX对小鼠滤纸血的PCR分析

实验例33: 用KOD FX扩增淡水刚毛藻属藻类(绿藻)DNA片段

实验例34: 用KOD FX对曲霉菌Aspergillus oryzae基因破坏的确认

实验例35: 用KOD FX通过菌落直接PCR检测各种细菌DNA

实验例36:  用KOD FX对指甲直接进行PCR 

实验例37:KOD FX对烟草叶直接进行PCR

实验例38:KOD FX对植物叶进行迅速的DNA扩增

实验例39:通过鳉鱼幼鱼的基因判断其性别的方法



参考文献

1) K. Wakahara et al., Mol Cancer Res 6: 1937-1945.(2008)
2) N. Yamada et al., Mol Vis., 15::974-979.(2009)

 
产品内容


   KOD FX DNA Polymerase (1U/μl)  200μl×1支

   2×PCR Buffer*  [KFX-1B]  1.7ml×3支

   2mM dNTP**[NTP-201] 1ml×2支

    *含有终浓度2.0mM的Mg2+

    ** 使用本酶进行PCR时,请使用dNTPs[NTP-201]。如果使用其他的dNTPs,有时可能得不到良好的扩增性能。


      ※50μl反应体系的情况下可使用200次。


活性的定义:
在75℃活性测定条件下,在30分钟内摄入10nmoles的全核苷酸使成为酸不溶物时所需酶的活性定义为1U。


来源:
  E.coli 重组体





基本反应条件


 灭菌蒸馏水   X μl

   2×PCR buffer for KOD FX  25μl

    2mM dNTPs  10μl(0.4mM)

     各引物        15pmoles each

      模板          1~50ng(Plasmid)

             10~200ng(Genome DNA)

             ~200ng[RNA相当](cDNA)

             ~2μl(粗样品)

  〈一步法植物裂解液1μl〉

     KOD FX (1U/μl)  1μl(1U)

        Total Volume  50μl



 〈2步法循环〉*

       94℃ 2min.

           ↓

      98℃ 10sec.

      68℃ 1min./kb 25~40 cycles


〈3步法循环〉*

      94℃ 2min.

          ↓

     98℃ 10sec.

    (Tm-5)℃ 30sec.

     68℃ 1min./kb 25~40 cycles  


〈Step down循环〉*

        94℃, 2min.

            ↓

       98℃, 10sec.

       74℃, 1min./kb 5 cycles

             ↓

       98℃, 10sec.

      72℃, 1min./kb 5 cycles

           ↓

      98℃, 10sec.

       70℃, 1min./kb 5 cycles

             ↓

       98℃, 10sec.

       68℃, 1min./kb 15~25 cycles

             ↓

           68℃, 7min.


*基本上以2步法循环进行。引物的Tm值低于68℃或用2步法循环未见扩增时,请试一下3步法循环。另外,扩增10kb以上的目的片段时,如果出现Long PCR片段或非特异条带及弥散,请试一下Step down循环。


※Tm值采用最邻近法(Nearest Neighbor method)计算得到的值。引物的Tm值计算表(EXCEL)请点击这里下载


<碱裂解法>

1) 将鼠尾(约3mm)放入离心管中。

2) 添加50mM NaOH 180μl。

3) Vortex充分振荡。

4) 95℃・10min.

5) 添加Tris-HC(l pH8.0) 20μl。

6) Vortex充分振荡。

7) 离心(12,000rpm, 10min.)

8) 取0.5~2μl上清进行PCR反应。

(鼠尾不会也无需完全溶解)


<一步法>

1) 将叶片(3mm)或精米(1粒) 放入离心管中。

2) 添加Buffer A* 100μl。

3) Vortex充分振荡。

4) 95℃・10min.

5) Vortex充分振荡。

6) 离心(12,000rpm, 10min.)

7) 取1μl上清进行PCR反应。

(植物组织不会也无需完全溶解)


*Buffer A:

 100mM Tris-HC(l pH9.5)

 1M KCl

 10mM EDTA




几点建议


PCR产物的克隆
由于本酶的PCR产物已被平滑化,可用平滑末端克隆法进行克隆。此时,如已对载体进行了脱磷酸化处理,就需要对PCR产物进行磷酸化,或使用带5'磷酸基的引物。 

另外,由于本酶的PCR产物已被平滑化,不能直接进行TA克隆。可使用按以下方法开发的TA克隆专用试剂盒「TArget Clone -Plus-」。


关于引物

扩增超过10kb的目的片段时,推荐使用OPC以上纯化级度,27mer以上的引物。另外,3'端有错配的引物,可能会受到本酶校正。

Tm值采用最邻近法(Nearest Neighbor method)计算得到的值。引物的Tm值计算表(EXCEL)请点击这里下载




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