快速SYBR Green荧光定量试剂盒
【产品简介】
TOROGreen®5G qPCR Premix是基于SYBR Green I染料法的 2×预混液,包含除引物和模板外的所有组分。本产品采用进化改造的化学修饰热启动Tth DNA 聚合酶-TOROIVD® 5G polymerase 2.0,可进行高速度、高特异的定量PCR分析。通过酶的改造及配方双重优化使得该试剂具有高抗抑制性,可进行样品直接PCR分析。该试剂中已预混ROX,可兼容绝大部分定量PCR仪,同时预混了蓝色指示剂,方便加样操作。
【产品组成】
TOROGreen®5G qPCR Premix (QST-300)采用20μL 反应体系可使用 1000 次。主要成分如下:
组成 | 规格 | 数量 |
TOROGreen®5G qPCR Premix | 1ml/管 | 10管 |
【储存条件】
所有组分请均保存于-20℃条件下。短期使用,请在2-8℃条件下保存。
【体系配制】
1. 试剂盒使用前请室温避光完全融化,并离心后使用。
2. 按照如下两种情况进行布板及总管分装加样设计。
基因最大化布板和加样设计
组分 | 添加量 | |
TOROGreen®5G qPCR Premix | 10μL×n | 充分混合分装 12μL/反应 |
cDNA 模板(逆转录产物稀释5倍以上) | 2μL×n | |
2μM 上游引物 | 4μL×n | 充分混合分装 8μL/反应 |
2μM 下游引物 | 4μL×n |
样品最大化布板和加样设计
组分 | 添加量 | |
TOROGreen®5G qPCR Premix | 10μL×n |
充分混合分装 12μL/管 |
8μM 上游引物 | 1μL×n | |
8μM 下游引物 | 1μL×n | |
cDNA 模板(逆转录产物稀释20倍以上) | 充分混合分装8μL/反应 |
3. 以上反应体系直接离心后上机。
【循环条件】
1.采用CFX 96(Biorad)的高速扩增条件
步骤 | 两步法 | 循环数 |
预变性 | 95℃,5min | 1 |
变性 | 98℃,3sec | 40 |
退火 | 60℃,5sec (数据收集) | |
延伸 |
2.采用Step One Plus(Thermo)的高速扩增条件
步骤 | 两步法 | 循环数 |
预变性 | 95℃,5min | 1 |
变性 | 98℃,3sec | 40 |
退火 | 60℃,10sec (数据收集) | |
延伸 |
3.采用其它型号仪器的通用条件:
步骤 | 两步法 | 循环数 |
预变性 | 95℃,5min | 1 |
变性 | 98℃,3sec | 40 |
退火 | 60℃,5-30sec (数据收集) | |
延伸 |
备注:因各仪器设置差异及控温差异,不同仪器的退火延伸时间需要从5-30sec之间优化调整,才能保证扩增速度和最佳循环条件的组合,一般情况20sec延伸可以作为通用延伸条件。
【应用数据】
目的基因:AMDH基因质粒
上游引物:AGGAAGCCGATGTGTTCGTT
下游引物:TTCCGCTTGCTGGTACACTT
仪器设备:CFX96 (BioRad)
扩增曲线和标准曲线如下:
【相关推荐】
基因表达分析时推荐使用含去基因组功能的反转录试剂盒RTQ-201:
货号 | 规格 | 规格 | 厂家 | 市场价格 |
RTQ-201 | TOROBlue® qRT Premix with gDNAEraser | 10μl 反应 100 次 | TOROIVD | ¥800 |
购买人 | 会员级别 | 数量 | 属性 | 购买时间 |
---|