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染料法快速定量PCR试剂盒
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染料法快速定量PCR试剂盒

快速SYBR Green荧光定量试剂盒

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商品描述

快速SYBR Green荧光定量试剂盒


产品简介

TOROGreen®5G qPCR Premix是基于SYBR Green I染料法的 2×预混液,包含除引物和模板外的所有组分。本产品采用进化改造的化学修饰热启动Tth DNA 聚合酶-TOROIVD® 5G polymerase 2.0,可进行高速度、高特异的定量PCR分析。通过酶的改造及配方双重优化使得该试剂具有高抗抑制性,可进行样品直接PCR分析。该试剂中已预混ROX,可兼容绝大部分定量PCR仪,同时预混了蓝色指示剂,方便加样操作。


产品组成

   TOROGreen®5G qPCR Premix (QST-300)采用20μL 反应体系可使用 1000 次。主要成分如下:

组成

规格

数量

TOROGreen®5G qPCR Premix 

1ml/

10

 

【储存条件】

所有组分请均保存于-20℃条件下。短期使用,请在2-8℃条件下保存。


体系配制

1. 试剂盒使用前请室温避光完全融化,并离心后使用。

2. 按照如下两种情况进行布板及总管分装加样设计。

基因最大化布板和加样设计

组分

添加量

TOROGreen®5G qPCR Premix

10μL×n

充分混合分装

12μL/反应

cDNA 模板(逆转录产物稀释5倍以上)

    2μL×n

2μM 上游引物

4μL×n

充分混合分装

8μL/反应

2μM 下游引物

4μL×n


样品最大化布板和加样设计

组分

添加量

TOROGreen®5G qPCR Premix

10μL×n

 

充分混合分装

12μL/

8μM 上游引物

    1μL×n

8μM 下游引物

1μL×n

cDNA 模板(逆转录产物稀释20倍以上)

充分混合分装8μL/反应

3. 以上反应体系直接离心后上机。


循环条件

  1.采用CFX 96(Biorad)的高速扩增条件  

步骤

两步法

循环数

预变性

955min

1

变性

983sec

40

退火

60℃5sec

(数据收集)

延伸

 

   2.采用Step One Plus(Thermo)的高速扩增条件  

步骤

两步法

循环数

预变性

955min

1

变性

983sec

40

退火

60℃10sec

(数据收集)

延伸

 

  3.采用其它型号仪器的通用条件:

步骤

两步法

循环数

预变性

955min

1

变性

983sec

40

退火

60℃5-30sec

(数据收集)

延伸

 

   备注:因各仪器设置差异及控温差异,不同仪器的退火延伸时间需要从5-30sec之间优化调整,才能保证扩增速度和最佳循环条件的组合,一般情况20sec延伸可以作为通用延伸条件。


应用数据

   目的基因:AMDH基因质粒

上游引物:AGGAAGCCGATGTGTTCGTT

下游引物:TTCCGCTTGCTGGTACACTT

仪器设备:CFX96 (BioRad)


扩增曲线和标准曲线如下:


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